Análise de fenótipos de resistência e suscetibilidade ao desenvolvimento de encefalomielite autoimune experimental: Importância do background genético no delineamento experimental de um estudo

Despite advances in science and technology in the search for alternative methods to replace animals in research, they are still indispensable for the evolution of scientific research and public health. For the refinement of research in animals, several models and genetic editing techniques were developed, which allow changes in the characteristics or properties of living organisms, generating reliable models of human systems and diseases in animals, contributing to the elucidation of illnesses mechanism and treatment. Experimental models developed through bidirectional genetic selection are valuable tools for the study of gene expression and modulation of multifactorial characters, allowing the concentration of genes of interest to the phenotypic character studied. The Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) model is widely used for a better understanding of the mechanisms involved in the development and progression of Multiple Sclerosis, a currently uncurable disease. This project aims to evaluate the importance of genetic background in the development of EAE, in strains genetically selected for maximum (AIRmax) and minimum (AIRmin) inflammatory response. The results demonstrate that the AIRmax animals are susceptible to the disease, as well as the strain classically used in the literature to develop the EAE model, C57BL/6. The AIRmin animals do not develop any clinical motor alterations, confirming the resistance factor of this strain to the development of EAE. Global genetic analysis showed that signaling pathways related to this disease are inhibited in AIRmin animals. Thus, we can suggest that these pathways play a key role in the development of EAE, and these animals could be used to assess the importance of these pathways and the modulating genes involved in this process. Given the importance of the genetic background for the reduction and refinement of the animals use, we can suggest that the collaborative work between biotherists and researchers can be extremely relevant for a scientific project experimental design.

Apesar dos avanços da ciência e tecnologia na busca de métodos alternativos para substituição dos animais na pesquisa, estes ainda são indispensáveis para a evolução da saúde pública. Para o refinamento das pesquisas foram desenvolvidas diversos modelos e técnicas de edição genética, que permitem alterações de características ou propriedades dos organismos vivos, gerando modelos fidedignos de sistemas e doenças humanas em animais, que contribuem para a elucidação do mecanismo e tratamento de doenças. Modelos experimentais desenvolvidos através de seleção genética bidirecional são ferramentas valiosas para o estudo da expressão e modulação gênica de caracteres multifatoriais, permitindo concentrar os genes de interesse ao caráter fenotípico estudado. O modelo de Encefalomielite Autoimune Experimental (EAE) é um modelo animal amplamente utilizado para uma melhor compreensão dos mecanismos de desenvolvimento e progressão da Esclerose Múltipla, doença atualmente sem cura. Este projeto objetiva avaliar a importância do background genético no desenvolvimento da EAE, em linhagens geneticamente selecionadas para máxima (AIRmax) e mínima (AIRmin) resposta inflamatória aguda. Os resultados demonstram que os animais AIRmax apresentam suscetibilidade à doença, assim como a linhagem classicamente utilizada na literatura para desenvolvimento do modelo de EAE, C57BL/6. Já a linhagem AIRmin não desenvolve nenhuma alteração clínica motora, confirmando o fator de resistência desta seleção ao desenvolvimento de EAE. A análise global gênica demostrou que vias de sinalização relacionadas a esta doença estão inibidas nos animais AIRmin. Assim, podemos sugerir que estas vias têm um papel fundamental no desenvolvimento da EAE, e estes animais poderiam ser utilizados para avaliar a importância destas vias e de genes moduladores deste processo. Dada a importância do background genético para a redução e refinamento da utilização de animais, podemos sugerir que o trabalho colaborativo entre bioteristas e pesquisadores pode ser de extrema relevância para um delineamento/desenho experimental de um projeto científico.

Modelos animais para estudo de Esclerose Múltipla / Animal models for the study of Multiple Sclerosis

Multiple sclerosis MS is a chronic demyelinating disease of the central nervous system CNS that affects mainly young adults. Of idiopathic etiology, it is believed that autoimmune mechanisms, genetic predisposition, history of viral infection, smoking, hypovitaminosis D, reduced exposure to ultraviolet rays and geographic location are factors associated with the development of the disease.One of the main features linked to MS is the occurrence of demyelinated lesions that creates an environment that prevents access, survival and differentiation of oligodendrocyte precursor cells (OPCs).In the course of the disease a failure in remyelination process occurs, mainly in chronic process of lesions.The clinical manifestations of the disease are attributed to the appearance of these lesions during periods of an outbreak, especially in the initial phase of the disease.The most common symptoms are: impaired vision due to inflammation of the optic nerve (optic neuritis), disabilities related to movement, cognitive and memory impairments, sensory deficits and a serie of heterogeneous manifestations, fact that hindered the rapid establishment of a definitive diagnosis. The disease can be classified as Recurrent Remitting (EMRR), the most common type of MS, where it can be observed the occurrence of sudden outbreaks that last at least 24 hours reaching days or weeks and regressing thereafter. In the Progressive Primary (EMPP) type, the patient does not have outbreaks, but progressively develops symptoms and sequels due to the disease. And finally the Secondary-Progressive (EMSP), which is defined when the patient initially presents outbreaks and remissions and, after some time, the disease becomes progressive and the patient worsens slowly, without necessarily having new outbreaks.This work aims to describe different animal models for the study of multiple sclerosis, pointing out their methodologies, use and reproducibility. There are several animal models for MS study, using different compounds as inducers, such as toxins, antibodies, cuprizone, among others. One of the animal models that most resemble characteristics of the Multiple Sclerosis in humans is the Experimental Autoimmune Encealomyelitis model, which besides to have excellent reproducibility is one of the most used model.

A esclerose múltipla EM é uma doença crônica e desmielinizante do sistema nervoso central SNC, que atinge principalmente adultos jovens. De etiologia idiopática, acredita-se que mecanismos autoimunes, predisposição genética, histórico de infecção viral, tabagismo, hipovitaminose D, exposição reduzida a raios ultravioleta e localização geográfica são fatores associados ao desenvolvimento da doença. A principal característica da EM é a formação de lesões desmielinizadas que cria um ambiente que impede o acesso, sobrevivência e diferenciação das células precursoras de oligodendrócito (OPCs). Com o decorrer do tempo há uma falha na remielinização, especialmente em lesões crônicas. As manifestações clínicas da doença são atribuídas ao aparecimento dessas lesões durante os períodos de surto, principalmente na fase inicial da doença. Os sintomas mais comuns são: comprometimento da visão devido à inflamação do nervo óptico (neurite óptica), incapacidades relacionadas ao movimento, prejuízos cognitivos e de memória, déficit sensitivos, enfim uma série de manifestações heterogêneas, fato que dificultava o estabelecimento rápido de um diagnóstico definitivo. A doença pode ser classificada como Remitente Recorrente (EMRR), o tipo mais comum de EM, onde ocorrem surtos súbitos que duram no mínimo 24 horas chegando a dias ou semanas e, então, melhoram. A Primária Progressiva (EMPP) é o tipo onde o paciente não apresenta surtos, mas desenvolve sintomas e sequelas progressivamente por conta da doença. E por fim a Secundária- Progressiva (EMSP) se define quando o paciente apresenta inicialmente surtos e remissões e, após algum tempo, a doença se torna progressiva e o paciente piora de forma lenta, sem que obrigatoriamente tenha novos surtos. O presente trabalho tem por objetivo retratar os diferentes modelos animais para estudo da esclerose múltipla, apontando suas metodologias, utilização e reprodutibilidade. Existem diversos modelos de estudo para EM utilizando animais, que utilizam diferentes agentes indutores da doença como, por exemplo, Toxinas, Anticorpos, Cuprizona, entre outros. Um dos modelos animais que mais se assemelha à doença em humanos, gerando diversas características semelhantes à Esclerose Múltipla é o modelo de Encefalomielite Autoimune Experimental, que além de apresentar excelente reprodutibilidade é um dos mais utilizados.

Efeitos da exposição à fumaça do cigarro e suas implicações na neuroinflamação / Effects of exposure to cigarette smoke and its implications on neuroinflammation

O Sistema Nervoso Central (SNC) humano é formado por cerca de 86,1 bilhões de neurônios entre o encéfalo e a medula espinhal. O desenvolvimento pré-natal humano (tempo da concepção ao nascimento) possui cerca de 38 semanas, e é dividido na fase embrionária que corresponde ao período das 8 semanas iniciais da gestação, seguido pela fase fetal. A fase embrionária é o período mais vulnerável à ocorrência de anormalidades congênitas. Por ser um órgão com grande período de desenvolvimento, o SNC está sujeito às alterações genéticas, epigenéticas e ambientais. Durante a fase de implantação do embrião, o DNA é mais vulnerável às influências externas, como à fumaça do cigarro, aumentando o risco de retardo do desenvolvimento fetal, o risco de morte súbita pós-natal e de anormalidades do sistema imune. Neste contexto, o objetivo deste trabalho é avaliar os efeitos da exposição à fumaça do cigarro sobre o processo de neuroinflamação da prole de camundongos C57BL/6 expostos à fumaça do cigarro durante a gestação e desafiados ou não com LPS. Para tanto, camundongos C57BL/6 fêmeas prenhes foram expostas à fumaça do cigarro desde o plug vaginal até o nascimento da prole. No 3º dia de vida, os filhotes foram separados para três linhas de trabalho: 1) in vivo: os animais foram desafiados com LPS pelo período de 4h, seguidos de eutanasia e análises de PCR Array do SNC. 2) in vitro: os encéfalos dissecados foram utilizados para a preparação de cultura mista de glia e da cultura enriquecida com neurônio. Após a maturação celular, as células foram estimuladas com LPS 100 ng/mL e, após 24h, foram realizados ensaios de CBA, citometria de fluxo, PCR, dosagem de NO, avaliação de morte celular e metilação global. 3) Encefalomielite Autoimune Experimental (EAE): após o desmame, os animais foram mantidos em suas caixas moradia por 8 semanas sem nenhum estímulo externo, e então foram imunizados com MOG35-55 para o desenvolvimento da EAE. Nos experimentos in vivo observamos o aumento da transcrição de genes relacionados ao processo inflamatório, como interleucinas e quimiocinas. Em relação aos experimentos in vitro observamos maior crescimento de células astrocitárias (astrogliose), e células da microglia com aumento de moléculas co-estimuladoras (CD80 e CD86) bem como da transcrição e concentração de citocinas pró-inflamatórias e produção de NO. Em cultura enriquecida de neurônio, foi observado aumento na porcentagem de células em apoptose no grupo exposto à fumaça do cigarro desafiados ou não com LPS. O bloqueio da atividade da microglia pela minociclina reverteu a apoptose e diminuiu a produção de NO minimizando a morte celular. Em relação aos experimentos de EAE, os animais expostos à fumaça do cigarro no período gestacional, quando imunizados na vida adulta apresentam aumento no grau da doença bem como maior persistência da mesma quando observado escore clínico, além de acompanhados de um grau maior de infiltrado celular e desmielinização. Desta forma podemos concluir que a exposição à fumaça do cigarro durante o período gestacional leva a uma programação fetal com aumento da resposta neuroinflamatória frente a um estimulo sistêmico, trazendo consequências na vida adulta

The human central nervous system (CNS) is made up of about 86.1 billion neurons between the brain and the spinal cord. The human prenatal development (time from conception to birth) is about 38 weeks, and is divided into the embryonic phase that corresponds to the period of the initial 8 weeks of gestation, followed by the fetal phase. The embryonic stage is the period most vulnerable to the occurrence of congenital abnormalities. Because it is an organ with a long period of development, the CNS is subject to genetic, epigenetic and environmental changes. During the embryo implantation phase, DNA is more vulnerable to external influences such as cigarette smoke, increasing the risk of delay on fetal development, risk of sudden postnatal death, and abnormalities of the immune system. In this context, the aim of this work is to evaluate the effects of exposure to cigarette smoke on the neuroinflammation process of offspring of C57BL/6 mice exposed to cigarette smoke during gestation and challenged or not with LPS. For this, pregnant female C57BL/6 mice were exposed to cigarette smoke from vaginal plug to offspring birth. On the 3rd day of life the offspring were separated into three lines of work: 1) in vivo: the animals were challenged with 1mg/Kg LPS and after 4h they followed to euthanasia; PCR analysis of the CNS was made in this period. 2) in vitro: dissected encephalons were used for the preparation of mixed culture of glia and the culture enriched with neuron. After cell maturation, the cells were stimulated with 100 ng/mL LPS and, after 24 hours, CBA, flow cytometry, PCR, NO assay, cell death and global methylation assays were performed. 3) Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE): After weaning, the animals were kept in their housing for 8 weeks without any external stimulus, and then were immunized with MOG35-55 for the development of EAE. In the in vivo experiments we observed increased transcription of genes related to the inflammatory process, such as interleukins and chemokines. In vitro experiments showed higher growth of astrocytes (astrogliosis) and microglia cells with increased stimulatory molecules (CD80 and CD86) as well as the transcription and concentration of proinflammatory cytokines and NO production. In the enriched neuron culture, an increase in the percentage of cells in apoptosis was observed in the group exposed to cigarette smoke challenged or not with LPS. Blocking microglial activity by minocycline reversed apoptosis and decreased NO production by minimizing cell death. The EAE experiments shows that the animals exposed to cigarette smoke in the gestational period, when immunized in adulthood, present an increase in the degree of the disease as well as a greater persistence of the disease; The higher as the clinical score higher is the degree of cellular infiltration and demyelination. In this way we can conclude that the exposure to cigarette smoke during the gestational period leads to a fetal programming with increased neuroinflammatory response to a systemic stimulus and that this is able to last until the adult stage

Avaliação do efeito da crotoxina conjugada a sílica nanoestruturada SBA-15 na dor crônica: aspectos imunomodulatórios, anti-inflamatórios e antinociceptivos / Evaluating the effect of crotoxin conjugated nanostructured silica SBA-15 in chronic pain: immunomodulatory, antinociceptive and anti-inflammatory aspects

Chronic pain is among the most disabling and costly afflictions, has a negative effect on physical and psychological health, daily activities, employment and economic well-being, being recognised as an important healty public problematic. Chronic pain is characterized by sensorial alterations (hyperalgesia and allodynia) and other symptoms such as lethargy, depression and anxiety. These sickness behaviours with chronic pain are suggestive of a subjacent immune activity. The persistent pain is often associated with some other disease, such as multiple sclerosis [MS], an example of autoimmune disorder. MS is one of the most common neurological disorders diagnosed in young adults; this neuroinflammatory autoimmune disease have common symptoms such as, fatigue, visual impairment, sensory impairment, weakness, urinary dysfunction, spasticity, incoordination, cognitive dysfunction and pain. Despite the advances in research related to chronic pain and multiple sclerosis, the treatments still presenting great difficulties, since that the administration of pharmacos there is no complete reversal of symptoms or cure. Moreover, there are continual reports of patients suffering from their undesirable adverse effects. Therefore, it is necessary to study new drugs for the treatment of these pathologies. It is known that the crotoxin (CTX) despite the toxic effect, in low doses, presents immunomodulatory, anti-inflammatory, antitumor and antinociceptive effect, revealing its potential for the clinical treatment of several pathologies. It is also known that the nanostructured SBA-15 silica, a protective vehicle of biomolecules, may decrease toxicity and increase the immune response to distinct immunogens including vaccins. Thus, the objective of this study was to evaluate whether crotoxin, when conjugated to SBA-15, has its toxic effect reduced and its antinociceptive e immunomodulatory effect enhanced, evaluating its interference on the inflammatory response in the Partial Injury models of the Sciatic Nerve (PSNL) and Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE). The results show that the CTX:SBA-15 complex has analgesic effect in both models of chronic pain and reduces the incidence and intensity of clinical signs (motor defict) induced by the EAE model. Further, the treatment with the complex modulates neuroinflammation by reducing the expression of glial cell markers and the expression of proinflammatory cytokines in the CNS. Summarizing, the present work expands the knowledge of the effect of CTX, silica SBA-15 and complex CTX:SBA-15, showing that silica has a protective mechanism, which allows the use of oral CTX. Our data also significantly increase the possibilities of using silica, demonstrating its capacity as a protective vehicle for drugs.

A dor crônica quando comparada a outras doenças é uma das mais incapacitantes, apresentando efeito negativo sobre a saúde física e psicológica, atividades de vida diária, emprego e ao bem-estar econômico, gerando altos custos aos serviços de saúde, sendo considerado, portanto um problema de saúde pública. A dor crônica caracteriza-se por apresentar alterações sensoriais (hipernocicepção e alodinia) e outros sintomas como letargia, depressão e ansiedade, o que caracteriza uma resposta clássica de doença sistêmica e sugere atividade imune subjacente. Esta condição pode estar frequentemente associada a algumas outras doenças, como a esclerose múltipla [EM], exemplo de desordem de origem autoimune; essa é uma das doenças neurológicas mais comuns diagnosticada em jovens adultos, que desenvolvem doença autoimune neuroinflamatória. Os sintomas mais comuns incluem fadiga, déficit visual e sensorial, fraqueza, disfunções urinárias, espasticidade, problemas de coordenação motora e cognitivos, dor, entre outros. Apesar dos avanços das pesquisas relacionadas a estas doenças, o tratamento ainda apresenta grandes dificuldades, pois mesmo com a administração de fármacos não há reversão completa dos sintomas ou cura; além disso, são constantes os relatos de pacientes que sofrem com efeitos adversos indesejáveis decorrente das terapias. Assim, faz-se necessário o estudo de novas drogas para o tratamento desta doença. Sabe-se que a crotoxina (CTX) apesar do efeito tóxico, em baixas doses apresenta efeito imunomodulatório, antiinflamatório, antitumoral e antinociceptivo, revelando seu potencial para o tratamento clinico de diversas doenças. Por sua vez, a sílica nanoestruturada SBA-15 quando utilizada como veiculo protetor de biomoléculas pode diminuir a toxicidade e favorecer a resposta imunológica a diversos imunógenos, incluindo vacinas. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar se a CTX, quando conjugada à sílica SBA-15, tem seu efeito tóxico diminuído e seu efeito antinociceptivo e imunomodulatório aumentado, avaliando ainda sua interferência sobre a inflamação nos modelos de Lesão Parcial do Nervo Isquiático (PSNL) e Encefalomielite Autoimune Experimental (EAE). Os resultados obtidos mostram que, o complexo CTX:SBA-15 apresenta efeito analgésico nos dois modelos de dor crônica e reduz a incidência e a intensidade dos sinais clínicos (defict motor) induzido pelo modelo de EAE. O tratamento com o complexo ainda, modula a neuroinflamaçao, reduzindo a expressão de marcadores de celulas gliais e a expressão de citocinas próinflamatótias no SNC. O presente trabalho amplia o conhecimento do efeito da CTX, da sílica SBA-15 e do complexo CTX:SBA-15, demonstrando ainda que a sílica apresenta mecanismo protetor, o que permite a utilização da CTX por via oral. Nossos dados ampliam, ainda, de maneira significativa, as possibilidades de uso da sílica, demonstrando sua capacidade como veículo protetor de fármacos.

Avaliação do efeito da crotoxina em animais portadores de encefalomielite autoimune experimental, um modelo de animais de esclerose múltipla / Evaluation of crotoxin effect in the experimental autoimune encephalomyelitis, an animal model of multiple sclerosis

A esclerose múltipla é uma doença inflamatória crônica, de origem autoimune, que acarreta diversas alterações motoras, cognitivas e sensitivas. Dentre as alterações sensitivas, a dor é um dos graves problemas que afetam pessoas portadoras desta doença, interferindo com diversos aspectos da vida do paciente. É importante ressaltar que a esclerose múltipla não tem cura, sendo que a terapêutica se concentra nas ações que retardam a progressão da doença e promovem o alívio dos sintomas, melhorando a qualidade da vida do paciente...

Multiple sclerosis is a Central Nervous System Inflamatory demyelinating disease that has as primary symptomps losses of sensory, cognitive and motor functions. Among the sensory alternations, pain is one of the major concern, afecting various aspects of the patients lives...

Avaliação do efeito da crotoxina em animais portadores de encefalomielite autoimune experimental, um modelo animais de esclerose múltipla / Evaluation of crotoxin effect in the experimental autoimmune encephalomyelitis, an animal model of multiple sclerosis

Multiple sclerosis is a Central Nervous System inflammatory demyelinating disease that has as primary symptoms losses of sensory, cognitive and motor functions. Among the sensory alterations, pain is one of the major concern, affecting various aspects of the patients lives. It is important to point out that MS has no cure, being the therapeutic approaches focused on stopping disease progression and cumulative neurological disability, promoting the relief of symptoms, improving the quality of life. Despite the importance of pain in multiple sclerosis, few experimental studies have been conducted in order to characterize the mechanisms involved in its genesis since locomotor impairments that accompany the disease difficult the response of the animals in experimental models of pain evaluation. Several animal models of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) have been developed, trying to reproduce, in animals, anatomical and behavioral changes observed in human multiple sclerosis. Recently, it was demonstrated that in MOG35- 55-induced EAE, an animal model of multiple sclerosis, hyperalgesia and allodynia, two phenomena of sensitization, appear before the onset of EAE symptoms, been considered "markers" of the same. Numerous studies in the literature have demonstrated the importance of compounds derived from animal poisons or toxins to treat a variety of human diseases. In this meaning, studies using crotoxin, a neurotoxin isolated from the venom of Crotalus durissus terrificus, demonstrated that this toxin is able to induce analgesic, antiinflammatory and immunomodulatory effects in different experimental models. Based on these information, the aim of this study is to evaluate the effect of crotoxin in the pain and in the onset and progression of clinical symptoms of experimental autoimmune encephalomyelitis, an animal model of multiple sclerosis. Our results demonstrated that MOG35-55-induced hyperalgesia arises before the onset of clinical signs, confirming previous data from Literature. Crotoxin, administered in a single dose, induced potent and long-lasting antinociceptive effect. When administered in repeated doses, besides interfering with the phenomenon of hypernociception, crotoxin interferes with the development and severity of the disease, observed by a delay in the onset of clinical signs as well as a lower intensity of these signs. In relation to the chemical mediation, the antinociceptive effect of crotoxin involves the participation of formyl peptide receptors, through the release of lipoxin A4, and the participation of muscarinic receptors. Since multiple sclerosis has no cure, results herein obtained confirm the importance of this study as well as the possible therapeutic effects of crotoxin previously observed.

A esclerose múltipla é uma doença inflamatória crônica, de origem autoimune, que acarreta diversas alterações motoras, cognitivas e sensitivas. Dentre as alterações sensitivas, a dor é um dos graves problemas que afetam pessoas portadoras desta doença, interferindo com diversos aspectos da vida do paciente. É importante ressaltar que a esclerose múltipla não tem cura, sendo que a terapêutica se concentra nas ações que retardam a progressão da doença e promovem alívio dos sintomas, melhorando a qualidade de vida do paciente. Apesar da importância da dor nos quadros de esclerose múltipla, poucos estudos experimentais têm sido realizados objetivando caracterizar os mecanismos envolvidos na sua gênese. Este fato decorre da dificuldade de avaliação da nocicepção, uma vez que as alterações motoras que acompanham a doença dificultam e interferem com as respostas dos animais em modelos experimentais de avaliação da sensibilidade dolorosa. Diversos modelos animais de Encefalomielite Autoimune Experimental (EAE) têm sido desenvolvidos para tentar reproduzir, em animais, as alterações anatômicas e comportamentais observadas na esclerose múltipla em humanos. Foi demonstrado recentemente que, em modelo de EAE induzida por imunização com MOG35–55, a hiperalgesia e alodínia, dois fenômenos de sensibilização que integram a hipernocicepção, aparecem em tempos anteriores ao aparecimento dos sintomas da EAE, podendo ser considerados fenômenos “marcadores” da mesma. Numerosos trabalhos da literatura têm demonstrado a importância de compostos derivados de venenos ou toxinas animais no tratamento de uma grande variedade de doenças humanas. Nesse sentido, estudos realizados utilizando a crotoxina, uma neurotoxina isolada do veneno de serpentes Crotalus durissus terrificus, demonstraram seu efeito analgésico, antiinflamatório e imunomodulatório em diferentes modelos experimentais. Assim, o objetivo deste trabalho é avaliar o efeito da crotoxina, tanto na dor quanto na instalação e evolução do quadro clínico da Encefalomielite Autoimune Experimental, modelo animal da esclerose múltipla. Nossos resultados demonstram que a hiperalgesia neste modelo, surge antes dos primeiros sinais clínicos, corroborando com os dados da literatura. A administração de crotoxina, em dose única e não tóxica, acarreta potente e duradouro efeito antinociceptivo. Ainda, quando administrada em doses repetidas, esta toxina, além de interferir com o fenômeno de hipernocicepção, interfere com o desenvolvimento e a intensidade da doença, observados por um retardo no início do aparecimento dos sinais clínicos bem como por uma menor intensidade nestes sinais. Com relação à mediação química, observamos que o efeito antinociceptivo da crotoxina envolve a participação de receptores peptídeo formil, por ação da lipoxina A4, e ainda, a participação dos receptores muscarínicos. Uma vez que a esclerose múltipla não tem cura, os resultados obtidos até o momento ressaltam a importância deste estudo, bem como confirmam os possíveis efeitos terapêuticos observados anteriormente para a crotoxina.

Behavioral investigation of mice with experimental autoimmune encephalomyelitis / Investigação comportamental de camundongos com encefalomielite autoimune experimental

Multiple sclerosis is a neuroinflammatory disease that results in serious neurological disability. Besides physical impairment, behavioral symptoms are also common in patients with multiple sclerosis. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is considered to be a model of multiple sclerosis and mimics the main features of the disease, such as demyelination and motor impairment. In this work, we aimed to study behavioral parameters in animals with EAE using the MOG35-55 model in C57BL/6 mice. We analyzed memory and anxiety in animals using the elevated plus maze, the step down inhibitory avoidance task and the memory recognition test. No differences in any tests were found when comparing controls and animals induced with EAE. Therefore, we conclude that behavioral changes in animals with EAE induced with MOG35-55 are probably subtle or absent.

Esclerose múltipla é uma doença neuroinflamatória que resulta em séria incapacidade neurológica. Além do comprometimento físico, sintomas comportamentais também são comuns em pacientes com esclerose múltipla. A encefalomielite autoimune experimental (EAE) é considerada um modelo de esclerose múltipla e mimetiza as principais caracte-rísticas da doença, como a desmielinização e a fraqueza motora. Neste trabalho, objetivamos estudar parâmetros comportamentais em animais com EAE usando o modelo de MOG35-55 em camundongos C57BL/6. Analisamos memória e ansiedade em animais utilizando o labirinto em cruz elevado, o teste da esquiva inibitória e o teste de memória de reconhecimento. Nenhuma diferença em quaisquer dos testes foi encontrada comparando animais controles e animais induzidos com EAE. Assim, concluímos que alterações comportamentais em animais com EAE induzidos com MOG35-55 são provavelmente sutis ou ausentes.

Mechanical hypernociception in experimental autoimmune encephalomyelitis / Hipernocicepção mecânica em encefalomielite autoimune experimental

BACKGROUND: Pain is an important clinical manifestation in multiple sclerosis (MS) patients, though it has been neglected in clinical and experimental researches. OBJECTIVE: To investigate the nociceptive response in MOG35-55 experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE)-induced mice. METHOD: EAE was induced in 8 to 10 week old C57BL/6 female mice with an emulsion of MOG35-55, Complete Freund Adjuvant, Mycobacterium tuberculosis H37 RA and pertussis toxin. Nociception was evaluated by the von Frey filaments method. A clinical scale ranging from 0 to 15 was used to assess motor impairment. RESULTS: Clinical evidence of disease started at day 10 and peaked at day 14 after immunization. Thereafter, there was no worsening of symptoms until day 26. The EAE-induced mice presented reduced pressure threshold at days 7th and 10th after immunization and before the onset of clinical motor signs. CONCLUSION : The hypernociception found validates MOG35-55 EAE as a model for the study of pain in multiple sclerosis.

INTRODUÇÃO: Dor é uma manifestação importante em pacientes com esclerose múltipla (EM), mas que tem sido negligenciada na pesquisas clínica e experimental. OBJETIVO: Investigar a resposta nociceptiva de camundongos com encefalomielite autoimune experimental (EAE) induzida por MOG35-55. MÉTODO: A EAE foi induzida em camundongos C57BL/6 fêmeas de 8-10 semanas com emulsão contendo MOG35-55, Adjuvante Completo de Freund, Mycobacterium tuberculosis cepa H37 RA e toxina pertussis. A nocicepção foi medida pelo método de filamentos de von Frey. Uma escala clínica variando de 0 a 15 foi utilizada para avaliar a debilidade motora dos animais. RESULTADOS: Os sinais clínicos da doença iniciaram-se no dia 10 e a gravidade máxima foi alcançada no dia 14 após a imunização. Não houve piora dos sintomas até o dia 26. Os camundongos induzidos com EAE apresentaram diminuição do limiar de pressão nos dias 7 e 10 após a imunização e antes do início dos sinais motores. CONCLUSÃO: A hipernocicepção verificada valida a EAE induzida por MOG35-55 como um modelo para estudos de dor em esclerose múltipla.